冬春季是呼吸道传染病的高发季节，由于气候多变和人群聚集等因素，呼吸道病原体的传播风险显著增加。在这一背景下，快速、准确的诊断对于及时控制疫情、减少传播风险以及优化治疗策略至关重要。但是由于不同病原体感染均可引起发热、咳嗽、流涕、咽痛等非特异性呼吸道症状，仅凭临床表现难以鉴别，尤其在儿童和老年人群中，多种病原体同时或先后感染比例高，增加了诊断和治疗难度^[1]。多重PCR技术是在单一PCR反应体系中，加入多对特异性引物，通过优化的反应条件，实现多个靶标核酸序列的同时、特异性扩增，且操作相对简单，成本较低。有研究提出呼吸道病原体检测中，多重PCR技术应用价值较高，能有效识别病毒-病毒、病毒-细菌、细菌-非典型病原体等共感染^[2]，本研究就此观点开展对比实验。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究从2024年11月开始，至2025年5月结束，我们对100例冬春季发生呼吸道感染的患者进行分析，女患者54例、男患者46例；年龄50岁-85岁，均值62岁。

1.2 方法

采集所有患者的鼻咽拭子样本，以单靶标的实时荧光定量PCR（qPCR）检测作为诊断标准，分别实施多重PCR检测和免疫荧光检测，检测项目为甲流、乙流、呼吸道合胞病毒、人腺病毒、鼻病毒和肺炎支原体。

1.3 观察指标

比较多重PCR检测和免疫荧光检测阳性率，以及两种检测结果灵敏度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值差异，灵敏度=真阳/(真阳+假阴)；特异性=真阴/(假阳+真阴)；阳性预测值=真阳/（真阳+假阳）；阴性预测值=真阴/（假阴+真阴）。

1.4 统计学分析

采用SPSS 26.0统计学软件进行数据分析，计量资料、计数资料分别以±s、n（%）表示，采用t、χ2检验。当P值在0.05以下时说明对比具有统计学学差异。

2 结果

2.1检测结果比较

qPCR检测结果显示，阳性和阴性患者数量分别为37例、63例，多重PCR技术检出阳性概率高于免疫荧光检测，差异显著（P＜0.05）。具体如下表1所示：

表1：临床疗效差异统计表

2.2诊断效能比较

多重PCR诊断效能优均于免疫荧光检测，差异显著（P＜0.05）。具体如下表2所示：

表2两种诊断方式效能统计表[n(%)]

3.讨论

呼吸道感染是致病微生物侵入呼吸道并进行繁殖导致的感染性疾病,冬春季低温、干燥、人群聚集等因素导致呼吸道病原体传播活跃，如流感、呼吸道合胞病毒、新冠肺炎、支原体等，具有极高的传染性和快速的传播速度。快速诊断能够迅速识别患者，从而及时采取隔离措施，有效切断传播途径，减少疾病在社区内的传播风险^[3]。这不仅有助于保护易感人群，还能为疫情防控赢得宝贵时间。但是由于病毒、细菌及非典型病原体混合流行，临床症状重叠度高，抗原检测、单靶标PCR等传统诊断方法存在耗时长、敏感性低或通量不足等局限^[4]。为克服传统方法的局限，满足快速、多重检测需求，多重PCR技术应运而生，并在近十年得到飞速发展和广泛应用。

多重PCR技术可以通过单管反应同时扩增多个靶标核酸，结合荧光探针或熔解曲线分析实现病原体的快速、并行检测。该种检测方式由于闭管操作可以减少污染，一次检测覆盖广谱病原体，避免因猜测而进行多次单项检测，提高诊断效率，尤其适用于症状不典型或混合感染风险高的患者，而且样本类型灵活，适用于多种呼吸道样本，包括鼻咽拭子（NPS）、口咽拭子（OPS）、鼻咽吸取物（NPA）、痰液、支气管肺泡灌洗液（BALF）等，在检测过程中，自动化程度高，减少人为操作误差，提高结果可靠性和实验室间可比性，降低对操作人员专业经验的依赖，因此在临床上得到了广泛应用^[5]。本研究将多重PCR技术应用于冬春季呼吸道病原体检测过程中，发现相比于免疫荧光检测，多重PCR技术检出阳性概率更高，诊断效能更加优异（P＜0.05），可见多重PCR显著提高了呼吸道感染病原体检出率，是应对冬春季呼吸道感染高峰的有力工具。

综上所述，通过多重PCR技术，可以快速、准确的诊断冬春季呼吸道感染疾病，它显著提高了病原体的检出率，极大缩短了诊断周转时间，为临床精准启动靶向治疗、实施有效感染控制和流行病学监测提供了关键依据，减轻医疗资源负担，值得推广。

参考文献：

[1]张慧,王馨,徐丛杉,等.2011—2020年兰州市住院严重急性呼吸道感染病例常见呼吸道病毒监测结果分析[J].中华实验和临床病毒学杂志,2022,36(1):59-64.

[2]赖流庆,付莎莉,魏艳艳,等.多重PCR检测技术在儿童急性呼吸道病毒感染中的应用[J].热带医学杂志,2023,23(1):92-95.  

[3]毛碧波,刘文渊,卢文波.2020年宁波市7954例儿童急性呼吸道感染病原体的流行特征分析[J].中国卫生检验杂志,2022,32(5):614-618.

[4]李革,余怡如,陈放.免疫荧光法应用于小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的效果分析[J].中国实用医药,2022,17(24):94-97.

[5]李虎虎,王宝强,王原媛,等.多重荧光PCR法和免疫荧光法诊断常见急性呼吸道病毒感染的一致性研究[J].标记免疫分析与临床,2022,29(9):1528-1531.